凝胶色谱净化在食品中有机氯农药残留量测定

       凝胶层析色谱作为一种样品的净化手段之一，在国外应用的已较普遍，在我国应用的还不普遍，随着分析技术的发展，GPC在我国农药残留前处理分离、净化方面的应用将越来越普遍，尤其是在富含脂肪、色素等大分子的样品分离净化方面，具有明显的净化效果。

　　凝胶渗透色谱的基本组成为六通阀、净化柱、泵等；全自动型主要由样品进样和收集系统、泵、分离柱、溶剂及计算机控制系统等组成。

　　凝胶渗透色谱的分离原理与通常使用的柱层析的区别主要是：通常柱层析是利用填料、样品和淋洗剂之间极性的差别来达到分离目的，而凝胶层析仪则是利用化合物中各组分分子大小不同而淋出顺序先后也不同而达到分离目的的，淋洗溶剂的极性对分离的影响并不起决定作用；对于净化含脂肪、色素较多的样品具有明显的优势。

       有机氯农药是用于防治植物病，虫害的组成成分中含有有机氯元素的有机化合物。主要分为以苯为原料和以环戊二烯为原料的两大类。以苯为原料的农药包括使用最早，应用*的杀虫剂DDT和六六六等，以环戊二烯为原料的有机氯农药包括七氯，DIE氏剂，AI氏剂等。 

常用的有机氯农药具有系列特性：

1.挥发性小，使用后消失缓慢 

2.一般是疏水性的脂溶性化合物 

3.氯苯架构稳定，不易被体内酶降解，在生物体内消失缓慢 

4.土壤微生物对这些农药的作用大多是把他们还原或氧化为类似的衍生物，这些产物也像其亲体一样存在着残留毒性问题。

有机氯农药通过食物链进入人体和动物体，能在心脏，肝，肾等组织中蓄积，蓄积的残留农药也能通过母乳排出，或转入卵蛋等组织，影响子代，因此各国对有机氯农药在食品中的残留控制甚严，美国，日本等不容许在食品中检测出环戊二烯杀虫剂。

【试剂】

1.丙酮（CH3COCH3）：分析纯

2.石油醚：沸程30℃-60℃，分析纯

3.乙酸乙酯（CH3COOC2H5）：分析纯

4.环己烷（C6H12）：分析纯

5.氯化钠（NaCl）:分析纯

6.正己烷（n-C6H14）:分析纯

农药标品：ａ-六六六、六氯苯、ß-六六六、r-六六六、五氯硝基苯、δ-六六六、五氯苯胺、七氯、五LVBENJI硫醚、艾试剂、氧氯丹、环氧七氯、反氯丹、ａ-硫丹、顺氯丹、ρ,ρ’-滴滴伊、DIE氏剂、异DIE氏剂、ß-硫丹、ρ,ρ’-滴滴滴、ο,ρ’-滴滴涕、异DIE氏剂醛、硫丹硫酸盐、ρ,ρ’-滴滴涕、异DIE氏剂酮、灭蚁灵、，纯度均不低于98%。

【仪器】

1.气相色谱仪：配有电子捕获检测器

2.凝胶净化系统：LC500凝胶净化系统

3.凝胶净化色谱柱

4.旋转蒸发仪

【样品处理】

1.试样制备

肉去筋后，切成小块，制成肉糜；乳品混匀

2.提取与分配

肉类：称取试样20g(精确到0.01g),加水15ml,加40ml BIN酮，振摇30min。

乳类：称取鲜乳试样20g(精确到0.01g),加40ml BIN酮。

分别向肉类，乳类加入氯化钠6g,充分摇匀，再分别加入30ml石油醚，振摇30分钟。静置分层后，将有机相全部转移至100ml具塞三角瓶中经无水硫酸钠干燥，称取35ml于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1ml，加约2ml乙酸乙酯-环己烷（等体积混合）溶液再浓缩，重复此操作3次，浓缩至约1ml，备用。

3、净化

凝胶净化系统：以乙酸乙酯-环己烷（等体积）作为流动相，泵流速设为5.0ml/min,抽取试样注入SGPCS-凝胶净化系统，收集7.5min-15min流分。将收集的流分旋转蒸发至1ml，用氮气吹至近干，用正己烷定容至1ml。

4、色谱分析

分别吸取1ul混合标准液及试样净化液注入气相色谱仪中，记录色谱图，用保留时间定性，试样和标准品的峰高或者峰面积比较定量。

                                                                    色谱谱图

1. ａ-六六六；2. 六氯苯；3.ß-六六六；4.r-六六六；5.五氯硝基苯；6.δ-六六六；7.五LV苯胺；8.七氯；9.五LV苯基硫醚；10.AI试剂；11.氧氯丹；12.环氧七氯；13.反氯丹；14.ａ-硫丹；15.顺氯丹；16.ρ,ρ’-滴滴伊；17.DIE氏剂；18.异DIE氏剂；19.ß-硫丹；20.ρ,ρ’-滴滴滴；21.ο,ρ’-滴滴涕；22.异DIE氏剂醛；23.硫丹硫酸盐；24.ρ,ρ’-滴滴涕；25.异DIE氏剂酮；26.灭蚁灵。