偶氮染料是一大类含偶氮基团 -N=N-的合成有机染料，常用于着色纺织品和皮革，但某些偶氮染料释放有致癌风险的芳香胺。因此，欧盟（EU）严格控制对这些有害胺类的暴露水平。欧盟法规 14362 [1, 2] 禁止使用释放 表 1 所列22种芳香胺类的偶氮染料，禁止将其用于与人体皮肤或口腔有直接或长期接触的纺织品和皮革制品中。

表 1. 分析用偶氮染料（化合物1、4、13和14未受欧盟法规控制） （放大图片）

时间 （min）	% B
0	14
4.5	29
8	29
9	50
10.5	65
12	90
14	100
15	14

表 2. 26种偶氮标准品的改良梯度分离

分析速度比推荐方法快80%

我们用 安捷伦Poroshell 120 EC-C18，3.0 x 150 mm，2.7 µm色谱柱和安捷伦1290 Infinity液相色谱仪，分析了26种芳香胺——包括EU禁止的22种。对EN 14362中的方法进行梯度改良，提高了在该柱上的分离度 （表 2）。标准品混合物用甲醇和流动相A（10:90）溶解，配制成浓度为12 µg/mL，于40 °C下避光保存。

EU方法采用4.6 x 250 mm，5 µm 色谱柱进行分析，梯度洗脱70分钟[ [1] ，但我们使用了Poroshell 120 EC-C18，3.0 × 150 mm，2.7 μm 色谱柱，为这些芳香胺类化合物提供了良好的选择性和峰形。2.7 µm表面多孔填料提供了与亚2 µm全多孔填料相近的性能，150 mm 色谱柱提供了非常高的峰容量。这类复杂混合物样品需要高峰容量，才能在短分析时间内得到更好的分离度。在这一混合物中，4, 4'-亚甲基双苯胺 （11）、6-甲氧基-间-甲苯胺（12）、 2,6-二甲基苯胺（13）、 2,4-二甲基苯胺（14）, 3,3'-二甲氧基对二氨基联苯 （15）和 3,3'-二甲基对二氨基联苯（16）很难分离，因为它们对梯度的略微变化非常敏感。现在我们通过改良梯度，在15分钟内分离了所有26种化合物 （图 1），比推荐方法几乎快80%。3.0 mm较小内径色谱柱比4.6 mm 内径色谱柱节省溶剂约60%左右。

图 1. 26种偶氮标准品在安捷伦Poroshell 120 EC-C18柱上得到了良好分离 （放大图片）

图 2. 在不同UV波长下偶氮染料的色谱图（上图240 nm、中图280 nm、下图305 nm ） （放大图片）

图 3. 2个不同批次流动相在2天中6次进样于240 nm处的色谱图显示出出色的重现性 （放大图片）

许多偶氮染料都有自己的zui大UV吸收，所以用多波长，包括240 nm、280 nm 和305 nm进行检测，每个峰都得到*信号 （图 2）。

耐用的色谱柱获得更高分离度和出色重现性

2.7 µm表面多孔填料的性能与1.8 µm填料相似，但反压低40%。即使使用150 mm色谱柱，zui大反压也只有580 bar，所以，该方法仍可以在600 bar压力限的UHPLC柱上运行。

较长的Poroshell 120 EC-C18色谱柱，与 安捷伦1290 Infinity液相色谱系统匹配，将在获得更高分离度、更快速度和更可靠结果方面为您提供更大的灵活性。 图 3 中的叠加色谱图表明，该方法具有良好的重现性。这些图谱包括用2个不同批次流动相在2天中得到的色谱图。

获得可靠结果仅需15分钟

用新的Poroshell 120 EC-C18表面多孔填料柱，在15分钟内基线分离了26种偶氮染料。该方法提供了出色的重现性和可靠的结果，分析时间缩短了近80%，溶剂用量减少了60%。

如需进一步了解 Poroshell 120 色谱柱的多种优点，可下载应用报告 5990-7705EN 以了解此次分析的详细资料。

参考文献